SERVICE

Mass Spectrometry Analysis

분석서비스 문의

분석서비스
icon-tel 02-323-8326  /icon-mail  tech@proteometech.com

분석의뢰서 바로가기

LC-MS/MS

사용기기

  • LC-ESI-MS/MS, Thermo LTQ Orbitrap XL with ETD System
  • Q-STAR Applied biosystems, Inc.
  • Q-TOF Waters

lc-ms/ms

특징

  • LC-MS를 수행하는데 있어 가장 민감하고 유연한 고성능 장비
  • Turbo SEQUEST® software를 이용하여 혼합물의 단백질 분석도 가능
  • Nano LC와 자동화 된 MS의 연결
  • 민감도 : fmol 범위

활용

1. IP, Pull-down한 시료의 SDS-PAGE 단백질 band분석
2. 여러 개의 단백질이 섞여 있는 시료 (젤, 용액)
3. MALDI-TOF 동정 실패 및 결과 검증
4. DB에 EST로 존재 가능성이 높은 시료
5. 유전자 재조합 단백질 발현 확인 (whole lysate를 SDS-PAGE에서 분리하여 발현 여부 확인)

MALDI-TOF

사용기기

  • MALDI-MS, Applied Biosystems Voyager-DE STR
  • MALDI-MS, Bruker Daltonics microflex LRF20

maldi-tof

특징

  • 전과정 및 데이터 처리에 대한 자동화
  • 높은 정확도와 post-source decay (PSD)를 구축
  • DataExplore™ software를 사용하여 유연한 데이터 처리 및 검색
  • 민감도 : fmol 범위
  • 정확도 : < 10 ppm

활용

1. 2DE spot이나 purity가 높은 단일 단백질의 동정
2. 단백질의 분자량 (M.W) 확인; Intact Mass service
3. Modification 관련 mass 검출
– Modification 된 단백질은 modification 종류에 따라 일정한 값으로 분자량에 변화가 생기게 되는 원리를 이용하여 분석

Peptide Mass FingerPrinting

프로테옴텍에서는 MALDI-TOF MS (Applied Biosystems Voyager-DE STR)를 보유하고 있어 정제된 단백질이나 2DE로부터 얻은 단백질 spot을 In-gel 상태나 용액 상태에서 trypsin등으로 가수 분해한 뒤 MALDI-TOF MS를 이용하여 peptide의 질량 지문 (peptide mass fingerprinting) 정보를 얻어 data base와 비교, 분석하여 표적 단백질을 동정합니다.

peptide

Protein Identification

2DE 이미지로부터 찾아낸 특이 단백질 spot에 대한 확인 및 동정은 MALDI-TOF 나 LC-MS/MS를 이용합니다.

최상의 단백질 동정 성공률을 위해서는 1 unit pH 단위로 분리된 2DE를 Coomassie blue G250 나 Sypro-Ruby staining으로 염색한 spot의 분석을 권합니다. (동정 성공률 90% 이상)

젤의 silver staining이 부득이한 경우는 MALDI compatible silver staining법을 이용해야 합니다. (동정 성공률 60% 정도)

그리고 이 방법으로부터 얻은 spot의 동정 의뢰시는 시료를 배송하기 전에 프로테옴텍의 담당자와 반드시 상담하셔야 합니다.

protein

Intact Mass Measurement

일반적으로 단백질의 분자량 확인은 SDS-PAGE를 이용하여 확인 하지만 분자량 차이가 크지 않은 경우는 확인 하기 어렵습니다.
이에 MALDI-TOF 를 이용하여 여러 단백질들의 분자량은 물론 특정 분자량의 변화를 확인 하실 수 있습니다.

intact

De novo peptide sequencing

새로운 단백질이나 데이터베이스에 존재하지 않는 단백질을 분석 하는 방법입니다. Peptide 조각들에 다시 물리적 혹은 전기적 충격을 가하여 한개의 아미노산 단계로 잘라 재구성하여 그 서열 정보를 알아내는 방법입니다.

프로테옴텍에서는 LC coupled ESI-MS/MS (Thermo LTQ Orbitrap XL with ETD System)를 보유하고 있어 정제된 단백질이나 2DE에서 얻은 단백질 spot을 In-gel상태나 용액 상태에서 trypsin등으로 가수 분해한 뒤 peptide화 된 단백질의 일부 아미노산 서열을 밝혀 이 정보를 가지고 기존의 data base와 비교, 분석하여 표적 단백질을 동정합니다.

통상 3개 이상 peptide의 아미노산 서열을 분석하여 서비스를 제공하고 있으며 peptide당 확인 가능한 아미노산서열은 평균 8-14개 정도 입니다.

This post is also available in: 영어 중국어

Copyright 2017 ⓒ Proteometech.